ABSTRACT
Introducao: O padrao-ouro para o diagnostico de COVID-19 e o teste molecular que permite a deteccao de acidos nucleicos de SARS-CoV-2 em amostras de swab Nasofaringeo (NPS). A deteccao precoce seguida do isolamento dos individuos infectados desempenha um papel crucial para impedir a propagacao da infeccao e o controle da pandemia. No entanto, a coleta de NPS e invasiva e desconfortavel para os pacientes, requer profissionais de saude especializados e pode ser um risco de infeccao cruzada para esses profissionais. Desta forma, avaliar outras fontes de material biologico, tal como a saliva, e fundamental para facilitar o diagnostico de COVID-19. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso da saliva como amostra biologica para a deteccao do RNA do SARS-CoV-2 e sua estabilidade pos coleta. Material e Metodos: Foram coletadas 954 amostras de saliva (5 mL) e de swab nasofaringeo (NPS) de individuos entre dezembro de 2020 e fevereiro de 2021 e analisadas em diferentes tempos (24h, 48h, 72h, 5 dias e 10 dias) apos a coleta. As amostras de saliva foram armazenadas em temperatura de 2degree a 8degreeC e extraidas puras e diluidas em solucao salina na proporcao 1:1. A extracao do RNA foi realizada em extrator automatico de acidos nucleicos (Extracta, Loccus) e o diagnostico molecular do SARS-CoV-2 foi realizado com o kit Gene FinderTM COVID-19 Plus RealAmp (OSang Healthcare). A idade media dos participantes foi de 37 anos (8 a 83 anos de idade) e a maioria dos individuos 738 (77,3%) foram nao-detectaveis e apenas 216 (22,7%) foram detectaveis para SARS-CoV-2. Entre os detectaveis, 96 (44,4%%) eram do sexo masculino e 120 (55,6%) do sexo feminino. A positividade na saliva foi posteriormente comparada com os resultados do NPS bem como a carga viral ou ciclo de limiar de amplificacao (Ct). Resultados e Discussao: A analise dos testes com a saliva e NPS demonstrou concordancia nos resultados de 210 (97%) pacientes detectaveis para COVID, em apenas 2,7 % (6/216) dos casos o SARS-CoV-2 foi detectado somente no NPS. Todos os participantes com resultado positivo para a RT-PCR apresentaram sintomas relacionados a COVID-19, sendo os mais comuns: tosse seca (19%), dor de cabeca (16%), coriza e dor de garganta (11%) e diarreia (8%). As amostras de salivas apresentaram estabilidade ate o decimo dia apos a coleta do material biologico, sem diferenca de deteccao do RNA viral entre a amostra de saliva pura e saliva diluida. Esses resultados demonstram que as amostras de saliva podem ser transportadas e armazenadas em temperatura de 2degree a 8degreeC, e processadas em ate 10 dias apos a coleta. Conclusao: Os resultados mostraram que a saliva e uma alternativa para a deteccao de SARS-CoV-2. E uma amostra biologica confiavel, nao invasiva, de facil coleta e com resultados similares aos obtidos com amostras de NPS. E uma alternativa que facilitaria a coleta em lugares com baixo suprimento de swabs nasofaringeos e regioes distantes de laboratorios especializados, uma vez que pode ser analisada ate 10 dias apos a coleta. Dessa forma, podemos concluir que a saliva pode ser utilizada com seguranca para o diagnostico de COVID-19. Copyright © 2022
ABSTRACT
No ano de 2019, um surto de pneumonia de causa desconhecida foi notificado em Wuhan, na China. O agente etiologico identificado se trata de um virus nomeado como Virus da Sindrome Respiratoria Aguda Grave (SARS-CoV-2). Esta infeccao e predominantemente caracterizada como uma infeccao do trato respiratorio. Embora nao haja evidencias sobre a replicacao viral do SARS-CoV-2 nas celulas do sangue periferico, este virus pode se disseminar para outros orgaos utilizando a circulacao sanguinea. Portanto, e possivel a ocorrencia de transmissao transfusional de SARS-CoV-2. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi determinar a soroprevalencia e a deteccao de RNA de SARS-CoV-2 no plasma de doadores de sangue do Hemocentro de Ribeirao Preto. Para isso, a coleta das amostras foi realizada no periodo de Janeiro de 2020 a Janeiro de 2022. Essas amostras foram divididas em dois grupos: i) Amostras de sangue de candidatos aptos a doacao de sangue e ii) Amostras de sangue de doadores que apresentaram sintomas caracteristicos da COVID-19 apos doacao (Informacao Pos-Doacao, PDI). Para a analise da soroprevalencia utilizamos o ensaio imunoenzimatico IgG anti-SARS-CoV-2 de 646 amostras de plasmas referidas ao ano de 2020. E para deteccao molecular de RNA de SARS-CoV-2 utilizamos a tecnica de RT-PCR em tempo real para a analise de 718 amostras coletadas durante os picos de pandemia. Os resultados obtidos na analise sorologica apresentou uma soroprevalencia de 0,002% nos doadores de sangue do Hemocentro de Ribeirao Preto no ano de 2020. Dentre esses, 4,87% reagentes, 94,3% nao reagentes e 0,9% inconclusivos. Estes percentuais representam 4,7% dos doadores de sangue do ano de 2020. Pela analise molecular por RT-PCR 2,36% das amostras testadas apresentaram positividade para COVID-19. Neste estudo, demonstramos a importancia de monitorar em ordem retrospectiva a exposicao de individuos a agentes virais emergentes. Embora, observamos uma reduzida positividade nos testes moleculares, os nossos dados indicam que o virus pode ser detectado no sangue periferico. Alem disso, evidenciamos a necessidade de estudos complementares de infecciosidade e carga viral para demonstrar a viabilidade de replicacao viral em amostras sanguineas. Apoio financeiro: INCTC/Cnpq (465539/2014-9), CTC/Fapesp (2013/08135-2), FUNDHERP. Copyright © 2022